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[主观题]

pBR322质粒载体携带着抗氨苄青霉素基因、抗四环素基因及大肠杆菌lacI基因的部分片段，可用于蓝白斑筛选重组克

隆。

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发布时间：2022-12-04

更多“pBR322质粒载体携带着抗氨苄青霉素基因、抗四环素基因及大肠杆菌lacI基因的部分片段，可用于蓝白斑筛选重组克”相关的问题

第1题

pBR322质粒来自枯草芽孢杆菌，它在遗传工程中是一个有用的外源基因载体。（)

pBR322质粒来自枯草芽孢杆菌，它在遗传工程中是一个有用的外源基因载体。( )

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第2题

从E.coli中分离到一种hemA突变体，这种突变是不可恢复的，并且需要生长在琥珀酸的平板上才能利用δ-氨基乙酰丙

酸合成血红素。希望利用该突变体去克隆E.coli的hemA基因。首先用Sau3A Ⅰ部分酶切E.coli的DNA，得到的DNA片段平均为2kb，然后将这些片段从BamH Ⅰ位点克隆到质粒pBR322中，连接后转化hemA突变体。根据氨苄青霉素抗性来选择重组体。将筛选到的氨苄青霉素抗性克隆重植在加有δ-氨基乙酰丙酸的平板上进行测试。请问：已经测试的Amp^r抗性转化子中有多少不再需要在培养基中添加琥珀酸？(E.coli基因组的全长为4500kb。)

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第3题

用限制性内切核酸酶Pst Ⅰ切割质粒pBR322后，再用外切核酸酶Exo Ⅲ进行系列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突

变体。

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第4题

分离pBR322 DNA可考虑用氯霉素扩增，分离pUC18质粒DNA则不必用氯霉素扩增，为什么？

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第5题

克隆的进行依赖于各种参与DNA新陈代谢的______的使用，它们主要是从原核细胞中分离的。______能够将DNA切割成

特定大小的片段。各种各样的DNA聚合酶也是克隆所必需的，包括将RNA转录出单链DNA的______。DNA______用于连接限制性片段。克隆也需要来源于微生物的DNA序列，包括用来运载被______克隆载体。质粒载体来源于天然细菌质粒，通常携带有______抗性基因。其他载体来源于噬菌体，如λ噬菌体，它们经过修饰后可以运输外源DNA。要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的______。人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。例如，极微量的DNA片段可以通过______得到扩增。在感兴趣基因的启动子上连接，如______或______之类的______基因能够定量检测基因的活性。

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第6题

哺乳动物生长激素抑制素是14个氨基酸残基组成的寡肽。有人用化学方法合成了这种多肽激素的基因，再融合到质粒

pBR322中。用这种嵌合质粒转化大肠杆菌，转化了的大肠杆菌便可以合成包含这个14肽的嵌合蛋白。在体外用溴化氰处理这种嵌合蛋白，可裂解出具有活性的生长激素抑制素。这个人工合成基因的序列如下：

5'AATTCATGGCTGGTTGTAAGAACTTCTTTTGGAAGACTTTCACTTCGTGTTGATAG3'

试推测这个14肽的氨基酸顺序。

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第7题

某研究者打算研究两个袋鼠基因A和B在大肠杆菌中的表达。在对基因A进行的实验中，用EcoRI部分酶解袋鼠DNA，将片

段插入质粒pBR322，转化到A基因缺失的大肠杆菌突变体中，并找一种需要A基因活性的选择标记。对基因B的实验是，用反转录酶合成袋鼠肝细胞mRNA，已知肝细胞含有可合成大量酶B的DNA拷贝。然后将这些DNA拷贝插入pBR322，转化到不能合成有功能B酶的大肠杆菌突变体中，将B活性作为选择标记。

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第8题

正在研究的是包含三个基因的基因家族。在转录开始后差不多同一时间里细胞质中出现三个基因的mRNA分子。曾经提

出如下假设：合成的是单个转录物，以三种不同的方式(可能是随机地产生三种mRNA分子)加工。主要证据是所有这三种mRNA分子的帽子邻接着同一顺序的四个核苷酸。整个基因家族已经作为一个单位克隆在质粒pBR322中。将质粒DNA部分变性，并在DNA-RNA形成杂交的条件下加入所有这三种mRNA分子。这样，一些质粒分子具有R环，也就是说，DNA的一股链与mRNA结合，而不是与其互补链结合并形成泡状结构。在含这些mRNA的质粒的电镜照片中可以看到图13-3-71中的分子(也能见到其他形式的分子)。上述假设正确吗？

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第9题

某种长3 kb的质粒带有一个氨苄青霉素抗性基因和一个四环素抗性基因，该质粒含有下列酶的单一位点：

EcoRⅠ、BglⅡ、HindⅢ、PstⅠ、SalⅠ。如果DNA克隆到EcoRⅠ位点，两种基因抗性都不受影响；DNA克隆到．BglⅡ、HindⅢ或SalⅠ位点，会破坏四环素抗性；DNA克隆到PstⅠ位点，会破坏氨苄青霉素抗性。用限制酶完全切割该质粒，得到以下结果：

(1)画出该质粒的酶切图谱，标明抗性基因的位置和酶切位点。 (2)如用HindⅢ切割未标记的上述DNA片段，得到5．5 kb和2．5 kb两段。如果在EcoRⅠ的3．5 kb酶切片段上没有HindⅢ切点，则用双酶(EcoRⅠ+HindⅢ)切割后会得到什么样的片段？

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第10题

质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环

质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×10⁶U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。

表16-2-10

酶混合物

片段分子量(×10⁶U)

EcoRI，PstI

EcoRl，BamHI

EcoRI，HindⅢ

EcoRI，SalI

EcoRI，BamHI，PstI

0.64.2.14

0.2.2.4

0.05.2.55

0.55.2.05