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[主观题]

克隆的进行依赖于各种参与DNA新陈代谢的______的使用,它们主要是从原核细胞中分离的。______能够将DNA切割成

特定大小的片段。各种各样的DNA聚合酶也是克隆所必需的,包括将RNA转录出单链DNA的______。DNA______用于连接限制性片段。克隆也需要来源于微生物的DNA序列,包括用来运载被______克隆载体。质粒载体来源于天然细菌质粒,通常携带有______抗性基因。其他载体来源于噬菌体,如λ噬菌体,它们经过修饰后可以运输外源DNA。要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的______。人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。例如,极微量的DNA片段可以通过______得到扩增。在感兴趣基因的启动子上连接,如______或______之类的______基因能够定量检测基因的活性。
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更多“克隆的进行依赖于各种参与DNA新陈代谢的______的使用,它们主要是从原核细胞中分离的。______能够将DNA切割成”相关的问题

第1题

如何使用甲基化酶对克隆DNA进行保护?有什么意义?
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第2题

质粒pHUBI DNA是双链环状,长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因,它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素

质粒pHUBI DNA是双链环状,长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因,它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点:EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性;在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形,在圆周上以5.7kb总长标出刻度。

表16-2-11

酶混合物片段长度(kb)
EcoRI

EcoRI,BamHI

EcoRI,HpaI

EcoRI,SalI

EcoRI,BglII

EcoRI,PstI

PstI,BglII

BglII,HpaI

5.7

0.4,5.3

0.5,5.2

0.7,5.0

1.1,4.6

2.4,3.3

1.3,4.4

0.6,5.1

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第3题

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:

假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:

画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:

其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。

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第4题

利用单链寡核苷酸引物对特异DNA片段进行体外快速扩增的方法被称为______技术,其依赖于3个温度的反复循环,每
一循环的3个步骤分别为______、______和______。
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第5题

靠依赖于DNA的DNA聚合酶Ⅰ所进行的DNA复制要求有作为一个引发物的游离3'-OH的存在。游离的3'-OH可以
通过以下三种途径获得:合成一个:RNA引物、DNA自我引发或者一个末端蛋白通过磷酸二酯键共价结合到一个核苷酸上。
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第6题

从正常细胞和反转录病毒(不含癌基因)感染的细胞(克隆1)中,分别分离出DNA,用限制酶酶切后做电泳并

从正常细胞和反转录病毒(不含癌基因)感染的细胞(克隆1)中,分别分离出DNA,用限制酶酶切后做电泳并转膜。以某原癌基因的cDNA作探针进行杂交,结果如下图所示:

反转录病毒插入位置在哪里?

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第7题

候选克隆法克隆基因的步骤有()

A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置

B.进行分子杂交,定位基因在染色体上的具体位置

C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段,确定进一步研究对象

D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因

E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析,推测其功能

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第8题

用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针,与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜(同科)DN

用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针,与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜(同科)DNA样品进行杂交。酶1处理的情况下显示出3条带,酶2处理后有1条带,酶3处理后有2条带。如何解释这一结果?

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第9题

用不同的限制酶Pst I和Saι I切割同一染色体DNA并克隆。利用X基因两端引物进行菌落扩增,在Pst工切
割的克隆中未能筛到X基因,但Saι I切割的克隆中筛到了X基因,为什么?

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第10题

从E.coli中分离到一种hemA突变体,这种突变是不可恢复的,并且需要生长在琥珀酸的平板上才能利用δ-氨基乙酰丙
酸合成血红素。希望利用该突变体去克隆E.coli的hemA基因。首先用Sau3A Ⅰ部分酶切E.coli的DNA,得到的DNA片段平均为2kb,然后将这些片段从BamH Ⅰ位点克隆到质粒pBR322中,连接后转化hemA突变体。根据氨苄青霉素抗性来选择重组体。将筛选到的氨苄青霉素抗性克隆重植在加有δ-氨基乙酰丙酸的平板上进行测试。请问:已经测试的Ampr抗性转化子中有多少不再需要在培养基中添加琥珀酸?(E.coli基因组的全长为4500kb。)
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第11题

用λ噬菌体作克隆载体时,外源DNA片断越小,克隆的成功率越高。()

用λ噬菌体作克隆载体时,外源DNA片断越小,克隆的成功率越高。( )

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