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[主观题]

你想将一个具有KpnI末端的DNA片段克隆到一BamHI末端载体上,问题是BamHI末端和KpnI末端不匹配,BamHI切割后产

生一个5'-突出端,而KpnI产生了一个3'-突出端(图16-3-33)。一个朋友建议你如图16-3-33所示那样,用寡核苷酸的连接小片段将它们连接起来,但你现在还是不很清楚这个计划是否可行,因为连接反应需要5'-磷酸基团和3'-羟基,虽然分子经限制酶切割产生了合适的末端,但寡核苷酸合成时两端均为羟基基团,虽然如图16-3-33那样是BamHI-KpnI的,但KpnI-BamHI的连接也可产生,你怀疑同样的寡核苷酸可以产生两种类型的连接。

你想将一个具有KpnI末端的DNA片段克隆到一BamHI末端载体上,问题是BamHI末端和KpnI末

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更多“你想将一个具有KpnI末端的DNA片段克隆到一BamHI末端载体上,问题是BamHI末端和KpnI末端不匹配,BamHI切割后产”相关的问题

第1题

如果你想将一个DNA双螺旋样品制成具有高放射性的DNA探针,你拥有可以从DNA内部切开产生3'-OH末端和5'
;-磷酸末端的DNA内切酶、完整的DNA聚合酶Ⅰ和放射性dNTPs,提出一个制作DNA放射性的方法。
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第2题

你正在研究一种在感染周期后期产生一套丰富蛋白质的DNA病毒。其中一种蛋白的mRNA被定位于线状基因组中部的一
个限制性片段。为确定精确位置,你将mRNA与纯化了的限制性片段退火,环境中具有DNA与RNA稳定杂交的双链,DNA两条链不能重新退火。电镜下检查退火的双链,结构如图8-3-28所示。在RNA/DNA杂合双链的末端为什么会有单链尾巴?

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第3题

怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR Ⅰ限制位点中去?
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第4题

某一染色体DNA经内切酶Sal Ⅰ切割后,产生了若干个具有黏性末端的DNA片段,将这些片段分别在T4 DNA连接酶的作
用下自身连接成环,然后导入受体细胞,这些片段都可以进行独立地复制。
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第5题

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每条链的顺序,将5'-末端用32P标记(通过多核苷酸激酶催化的反应),再用Maxam-Gilbert序列法测定。切得片段的混合物经电泳后可得到如图2-3-50B所示的图谱(图中迁移方向为自上而下,片段越小移动距离越远)。仔细观察一下电泳图谱,回答下列问题:

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第6题

Ⅱ类限制性内切核酸酶分子质量较小,一般在20~40kDa,通常由______亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA,极少数
Ⅱ类酶也可作用于单链DNA,或DNA/RNA杂合双链。这类酶的专一性强,它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求,而且对更远的碱基也有要求,因此,Ⅱ类酶既具有______专一性,也具有______专一性,一般在识别序列内切割。切割的方式有______,产生______末端的DNA片段或______的DNA片段。作用时需要______作辅助因子,但不需要______和______。
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第7题

DNA聚合酶Ⅰ除了聚合活性外,还具有3'→5'校读外切酶活性。在校读过程中这一活性可从新合成的DNA链末端
去除错配碱基。为了验证这一点,你准备了一个带一个poly(A)的人工底物,以及一条3'一末端几个32P标记的dT残基后带几个3H标记的dC残基的ploy(dT)链,如图6-3-7(A)所示。在没有dTTP时标记了的dT和dC残基缺乏,此时不可能合成DNA;或有dTTP存在,此时有DNA合成,结果如图6-3-7(B)所示。

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第8题

在开始研究遗传密码时,Crick和他的同事坚信:T4噬菌体的rⅡB蛋白的N末端对其生长不是必需的。一个理由是存在一

在开始研究遗传密码时,Crick和他的同事坚信:T4噬菌体的rⅡB蛋白的N末端对其生长不是必需的。一个理由是存在一个名为R158G的缺失突变体,其缺失从rⅡB基因的N末端到rⅡA基因的C末端,产生一个融合的rⅡA-rⅡB蛋白,该蛋白有rⅡB的功能,但没有rⅡA的功能。从遗传数据和异源双链电子显微镜图判断,这个缺失片段约900到1100核苷酸长。以下是猜测的四个精确长度:980、984、988和1088。编码rⅡA蛋白C末端和rⅡB蛋白N末端的DNA序列表明有个14核苷酸序列把两基因隔开。这些证据是使你排除一些错误的值,到底哪些是错的呢?(换一种方式提问,r1589缺失或把rⅡA和rⅡB多肽链融合在一起的任何其他缺失必须遵循什么规律?)

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第9题

具有EcoR Ⅱ末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR Ⅱ末端的载体中。
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第10题

噬菌体中DNA分子具有短的互补的单链末端,当它感染细菌时该分子环化。图16-3-7的A和B分别显示用Bam限制酶处理

噬菌体中DNA分子具有短的互补的单链末端,当它感染细菌时该分子环化。图16-3-7的A和B分别显示用Bam限制酶处理游离的DNA分子后得到的限制酶图谱和凝胶电泳条带。从受感染的细胞中分离出DNA进行特性研究。在某些条件下酶解后的片段经电泳后结果如图16-3-7C所示。试问在这些条件下DNA呈怎样的结构?

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第11题

你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段,其中一个长为400bp,另一个长900bp,你想要如图16-3-20(1)

你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段,其中一个长为400bp,另一个长900bp,你想要如图16-3-20(1)所示将它们连接起来产生一个杂合基因,如果你的推测是正确的话,就会得到令人惊奇的新物质。

你在DNA连接酶存在情况下将两种片段混合在一起并且进行孵育,30分钟后和8小时后,你取一些样品进行琼脂糖凝胶电泳分析,你惊讶地发现连接得到了一系列复杂的DNA片段而不是所需的1.3kb小片段,并且发现孵育时间越长,小片段浓度越低而大片段浓度增加,如果你用BamHI切割连接后的重组体,你会重新获得开始的两片段(图16-3-20(2)A)。

令人吃惊的是,你将从琼脂糖凝胶中纯化得到的1.3kb片段用BamHI消化,检查它的结构,与预想的一样,可以得到最初的两片段(图16-3-20(2)B)。这就可以确定这是你所需的结构。但是,你用EcoRl消化另一份样品,你希望通过消化得到300bp的片段和700bp的片段,但你跑的电泳是一系列DNA片段(图16-3-20(2)B)。

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