你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段,其中一个长为400bp,另一个长900bp,你想要如图16-3-20(1)
你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段,其中一个长为400bp,另一个长900bp,你想要如图16-3-20(1)所示将它们连接起来产生一个杂合基因,如果你的推测是正确的话,就会得到令人惊奇的新物质。
你在DNA连接酶存在情况下将两种片段混合在一起并且进行孵育,30分钟后和8小时后,你取一些样品进行琼脂糖凝胶电泳分析,你惊讶地发现连接得到了一系列复杂的DNA片段而不是所需的1.3kb小片段,并且发现孵育时间越长,小片段浓度越低而大片段浓度增加,如果你用BamHI切割连接后的重组体,你会重新获得开始的两片段(图16-3-20(2)A)。
令人吃惊的是,你将从琼脂糖凝胶中纯化得到的1.3kb片段用BamHI消化,检查它的结构,与预想的一样,可以得到最初的两片段(图16-3-20(2)B)。这就可以确定这是你所需的结构。但是,你用EcoRl消化另一份样品,你希望通过消化得到300bp的片段和700bp的片段,但你跑的电泳是一系列DNA片段(图16-3-20(2)B)。