某一重组质粒(7.5kb)的载体部分有2个SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现4条长度不同的条带,其长度总和与已知数据吻合,该重组质粒中插入的外源DNA片段上的SmaI酶切位点共有()
A.5个
B.4个
C.3个
D.2个
A.5个
B.4个
C.3个
D.2个
第2题
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第4题
第6题
A.是由λ噬菌体与质粒DNA重组的载体
B. 既有质粒的特性,又有噬菌体DNA的特性(如可体外包装)
C. 可插入大片段的外源DNA片段
D. 可像YAC载体那样构建大片段的基因组文库
第7题
A.营养成分不足
B. 重组后的质粒复制不稳定
C. 重组后的黏粒整合到宿主染色体上
D. 重组体中插入片段的大小不同
第9题
A.重组DNA分子导人受体细胞
B.外源基因与载体的拼接
C.基因载体的选择与构建
D.筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞
E.表达目的基因编码的蛋白质