第1题
A.用限制酶消化DNA。
B.把DNA连接入一个载体。
C.在胶上分离DNA片段
D.把DNA片段转移到硝酸纤维素膜上。
E.膜与标记的探针杂交。
第2题
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:
画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
第5题
爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且呈单链形式结合在滤膜上的DNA进行杂交。该RNA:DNA杂交分子与原肠胚期爪蟾胚胎的非标记细胞质总RNA相竞争。图13-3-68A是假设的结果。在另一相应但相反的实验中,放射性原肠胚期细胞质RNA(原肠胚期胚胎用3H-尿苷标记)与滤膜上的总DNA杂交,该RNA:DNA杂交分子与非标记的后期卵细胞质RNA相竞争,结果如图13-3-68B。
第6题
第7题
从正常细胞和反转录病毒(不含癌基因)感染的细胞(克隆1)中,分别分离出DNA,用限制酶酶切后做电泳并转膜。以某原癌基因的cDNA作探针进行杂交,结果如下图所示:
反转录病毒插入位置在哪里?
第10题
核酸酶S1能在双链DNA分子中将不配对的两碱基打断,如果从美国实验室分离到一种品系的λ噬菌体DNA分子与从法国实验室分离到的假定基因型是同一品系的λ噬菌体DNA分子杂交,接近一半的杂交DNA分子被S1酶切开,请解释。
第11题
A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置
B.进行分子杂交,定位基因在染色体上的具体位置
C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段,确定进一步研究对象
D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因
E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析,推测其功能