第1题
图Q4.2多种rⅡ突变体的斑块测试
这些结果很有意义,但你也许会感觉迷惑。为了确定在清晰斑上出现的是哪种噬菌体,你从野生斑和突变5形成的清晰斑中收集一些噬菌体并检测它们的生长情况。如你所料,从野生斑上收集的噬菌体在大肠杆菌B和K上都可形成正常的噬菌斑。在突变5斑块上收集来的大多数噬菌体仍显示出突变体的性质:它们可以在大肠杆菌B上形成r噬菌斑,但不能在大肠杆菌K上生长;但来自突变5斑块上的某些噬菌体却表现为野生型,它们可在两个细胞株中形成正常的噬菌斑,野生型出现的频率很高,不可能来自反向突变(回复突变),因为反向突变即使发生,频率也只有10-6~10-5。
第2题
第4题
A.带有trp的λ噬菌体侵染了细胞
B. 发生了回复突变
C. 与野生型细胞发生了接合
D. 发生了野生型细胞的转化
E. 以上都不对
第6题
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第7题
第8题