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在酶纯化实验中，_______和______是重要检测指标。
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第2题
由MNNG(亚硝基胍)引起的诱变损伤的本质以及它从DNA上被修复的机制可以用下面的实验来鉴定。为了确定诱变损伤的本质，未经处理的细菌和已用低剂量MNNG处理的细菌都在含50μg/ml的3H-MNNG的培养物中培养10min。分离它们的DNA并水解成核苷酸，然后经过纸层析分析放射性的嘌呤，结果如图Q12.2所示：
图Q12.2 层析法分离未被处理和已被低剂量MNNG处理的细菌DNA中被标记的甲基化嘌呤实线表示未被处理细菌DNA中的甲基化嘌呤；虚线表示MNNG处理的细菌所得结果
为了研究诱变损伤切除的机制，首先纯化负责切除的酶，把不同量的酶(相对分子质量19000)和已被3H标记含0.26pmol突变碱基的DNA一起温育，分析切除动力学。在不同时间取样，分析DNA以确定还存在多少突变残基(图Q12.3)。当在5℃而不是37℃时重复这个实验时，虽然最初的切除速率较慢，却得到一样的终点。
图Q12.3纯化的甲基转移酶把3H标记的甲基从DNA上切除所示为纯化酶的量
第4题
利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统，来研究σ因子在原核转录中的作用。在10-10mol和10-11mol两种不同浓度的核心酶催化下32P掺入到RNA的图如下所示，σ因子浓度恒定为10-12mol。
第5题
第6题
野生型噬菌体X4DNA用限制酶处理后，用凝胶电泳分离纯化得5个片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V。现通过与X4的遗传图(图16-3-9)比较来对这些片段定位。用图16-3-9所示5种突变进行25次转染试验。实验包括：从单突变体得到的完整DNA以及纯化的片段，用它对Rec+细胞进行转染。数据如表16-3-9所示(数值表示每微克完整DNA分子产生的噬菌斑数)。试问片段的顺序如何(自图的左边开始)？
| 表16-3-9 | |||||
| 突变体 | |||||
| Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | Ⅴ | |
| a- b- c d- e- | 21 6 32681 1 22 | 14 0 16 3 17 813 | 21842 4 8 0 27 | 3 4856 11 1 18 | 8 2 13 1825 30 |
第7题
| 表14-3-14 蛋白酶抑制剂对纯化肌动蛋白轻链激酶活力的影响 | ||
| 纯化表格 | 加入的试剂混合物 | 相对活力 |
| 负型抑制剂 | 没有 | 50 |
| 负型抑制剂 | Ca2+ | 50 |
| 负型抑制剂 | 钙调素 | 50 |
| 负型抑制剂 | Ca2+/钙调素 | 50 |
| 正型抑制剂 | 没有 | 1 |
| 正型抑制剂 | Ca2+ | 1 |
| 正型抑制剂 | 钙调素 | 1 |
| 正型抑制剂 | Ca2+/钙调素 | 100 |
通过凝胶过滤和离子交换层析部分地纯化激酶，接着在Ca2+存在下通过钙调素亲和柱。使人高兴的是，所有有活性的激酶均粘在柱子上，并且当用Ca2+螯合剂EDTA洗脱时能定量地洗脱下来。根据表14-3-14所示，纯化酶现在像所希望的那样，这表明了酶绝对依赖于Ca2+/钙调素。在此基础上，你可直接通过钙调素亲和柱挽救最初纯化的酶样品。令人惊奇的是激酶直接通过柱子，不论Ca2+存在与否。
第11题
