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通过差示杂交后制备的cDNA文库使克隆那些只在特定分化细胞中表达基因的概率大为提高。
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第2题
当处理过的细胞分化时，大约25%的细胞转变为肌肉细胞(肌原纤维)，肌原细胞形成的高频率导致一种假说的建立，一个独立的主调控基因，它正常情况下由于甲基化受到抑制，它可以启动完整的转化。估计这个基因在用5'-氮化胞苷处理前是处于关闭状态，而在诱导的肌原细胞中呈开放状态。如果这个设想是真的，在用5'-氮化胞苷处理后的mRNA的cDNA拷贝中应能找到与这个用5'-AzaC处理后就开始启动的基因有关的序列。对策是应用一套放射性探针从正常肌原细胞(这种细胞按照你的设想也能表达这个基因)获得的cDNA文库中挑选可能的cDNA克隆。应准备三种放射性探针：
探针1：从5'-氮化胞苷诱导的肌原细胞中分离RNA，制备含放射性的cDNA探针。
探针2：用5'-AzaC处理的肌原细胞中的有放射性的cDNA与未经处理的10T1/2细胞中的RNA进行杂交，除去所有的RNA和DNA杂合体。
探针3：从正常的肌原细胞中分离RNA，制备放射性DNA探针，然后与未经处理的10T1/2细胞中的RNA杂交，除去所有的RNA和DNA杂合体。
第一个探针同cDNA文库中的大多数克隆发生了杂交，但是这些克隆中只有约1%的克隆与探针2或探针3进行杂交。总之，有四种独特的杂交模式(表13-3-54)。
| 表13-3-54 | |||
| Class | Probe 1 | Probe 2 | Probe 3 |
| A B C D | + + + + | — — + + | — + — + |
第5题
A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置
B.进行分子杂交，定位基因在染色体上的具体位置
C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段，确定进一步研究对象
D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因
E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析，推测其功能
第7题
第8题
从正常细胞和反转录病毒(不含癌基因)感染的细胞(克隆1)中，分别分离出DNA，用限制酶酶切后做电泳并转膜。以某原癌基因的cDNA作探针进行杂交，结果如下图所示：
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反转录病毒插入位置在哪里？
第9题
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：
1.jpg)
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：
2.jpg)
画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：
3.jpg)
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
第10题
