小鼠胚胎细胞成纤维细胞细胞系10T1/2是一个非常稳定的细胞系，它的细胞以及细胞的行为看起来都与正常成纤维

细胞相似。如果这些细胞在含5'-氮化胞苷的培养基中培养24小时，随后当它们长到很高的密度时，用5'-Azac处理会降低DNA甲基化的正常水平，使原先没有活性的基因活化为开放基因。它们将分化为软骨细胞、肥大细胞和肌肉细胞。如果这些细胞用5'-AzaC处理过后，在低细胞浓度下生长，它们保持原有成纤维细胞的特性，但是当生长许多代后，细胞达到高密度时又会分化。10T1/2细胞如果不曾用5'-氮化胞苷处理过，无论细胞浓度如何都不会引起分化。

当处理过的细胞分化时，大约25%的细胞转变为肌肉细胞(肌原纤维)，肌原细胞形成的高频率导致一种假说的建立，一个独立的主调控基因，它正常情况下由于甲基化受到抑制，它可以启动完整的转化。估计这个基因在用5'-氮化胞苷处理前是处于关闭状态，而在诱导的肌原细胞中呈开放状态。如果这个设想是真的，在用5'-氮化胞苷处理后的mRNA的cDNA拷贝中应能找到与这个用5'-AzaC处理后就开始启动的基因有关的序列。对策是应用一套放射性探针从正常肌原细胞(这种细胞按照你的设想也能表达这个基因)获得的cDNA文库中挑选可能的cDNA克隆。应准备三种放射性探针：

探针1：从5'-氮化胞苷诱导的肌原细胞中分离RNA，制备含放射性的cDNA探针。

探针2：用5'-AzaC处理的肌原细胞中的有放射性的cDNA与未经处理的10T1/2细胞中的RNA进行杂交，除去所有的RNA和DNA杂合体。

探针3：从正常的肌原细胞中分离RNA，制备放射性DNA探针，然后与未经处理的10T1/2细胞中的RNA杂交，除去所有的RNA和DNA杂合体。

第一个探针同cDNA文库中的大多数克隆发生了杂交，但是这些克隆中只有约1%的克隆与探针2或探针3进行杂交。总之，有四种独特的杂交模式(表13-3-54)。

表13-3-54
Class	Probe 1	Probe 2	Probe 3
A B C D	+ + + +	— — + +	— + — +