最常见的DNA修饰是甲基化,在原核细胞中,它指:
A.鉴别需修复的损伤DNA。
B.区别复制后的核酸链和允许/不允许继续复制。
C.鉴别在重组中插入到基因组中的甲基化的外源DNA。
D.保护自身DNA免受内切核酸酶作用,而不保护外源DNA。
E.鉴别转录起点并召集RNApol。
A.鉴别需修复的损伤DNA。
B.区别复制后的核酸链和允许/不允许继续复制。
C.鉴别在重组中插入到基因组中的甲基化的外源DNA。
D.保护自身DNA免受内切核酸酶作用,而不保护外源DNA。
E.鉴别转录起点并召集RNApol。
第1题
A.修饰酶通过甲基化作用对自身DNA进行修饰
B.通过Ⅱ型限制酶实现对外源DNA的分解
C.由两类酶完成
D.通过I型限制酶实现对外源DNA的分解
第2题
第6题
为了区别复制和未复制的模板,利用限制性核酸内切酶(DpnI,MboI和ScuBA),它们对于所识别序列GATC的甲基化的敏感性不同(如图13-3-52所示)。这个序列一旦在5SRNA的起始处出现,并且如果DNA在这个位点被切割,转录就不能发生。如果模板在野生型大肠杆菌复制,GATC序列的两条链中的A都被细菌中的Dam甲基化酶甲基化,完全甲基化DNA在体外的复制产生子代双螺旋,在第一轮复制中,只有一条链被甲基化,而在以后的复制循环中DNA就无甲基化。你的想法起始于完全甲基化DNA和诱导它在体外进行复制,然后分析用DpnI处理过的复制DNA上的转录。DpnI只切割未复制的完全甲基化DNA,但是它不能切割复制的DNA。因而它对转录有保护作用。
为了验证方案是否起作用,可构建一个比正常的5SRNA基因略长的基因(大基因),它的RNA转录产物与正常5SRNA基因的转录产物很容易区别(如图13-3-52A所示)。然后将完全甲基化的大基因同甲基化或未甲基化的正常基因混合,在用DpnI、MboI和Sau3A消化前后分别检查它们的转录。限制性内切酶的专一性如图13-3-52A所示。为了验证复制对转录的影响,在完全甲基化的大基因上装配一个转录复合物,诱导复制,并在用限制性内切酶作用前后分别检查转录活性,结果如图13-3-52B所示。
第9题
用Maxam-Gilbert法测定单链DNA分子的核苷酸顺序。一份DNA样品进行四种不同处理。
(1)DNA与硫酸二甲酯反应,该试剂使G和A都甲基化.但与G的反应快5倍。然后加热DNA,这样可除去甲基化的G和A残基。然后加碱,这时与甲基化碱基相连的糖从两侧的磷酸二酯键上断裂下来。
(2)如第1步中用硫酸二甲酯处理后将DNA放入稀酸溶液;这种处理使A优先脱落。在碱性条件下DNA的磷酸二酯键断裂。
(3)DNA与肼反应,再用吡啶处理。和第1和第2步的结果一样,磷酸二酯键发生断裂,但在T和C部位断裂频率相同。
(4)在2mol/LNaCl中进行第3步处理;这样可防止T处的断裂。这几步反应控制在每50个碱基中有一个发生甲基化或肼解反应。进行彻底水解反应。每组反应混合物由一组片段组成,它们的长度由特定碱基的位置决定。聚丙烯酰胺凝胶电泳可将每组混合物中的片段根据长度进行分离。通常DNA末端用32P标记,这样凝胶中的片段可以用放射自显影定位。根据每个位置上带的密度可以从凝胶上读出顺序。须注意的是带的位置可确定碱基的部位,但是带的密度与断裂的几率有关。图2-3-49显示某样品的有关图谱。