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[主观题]

用寡聚DNA进行高度严紧的杂交可用于胎儿遗传病的诊断,可检测到因单个核苷酸变化而造成的基因突变。

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第1题

RNA与基因组DNA的杂交已被广泛用于检测不同类DNA的转录。用DNA-drivenassociation experiment和用RNA进行的
复性实验有什么区别?
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第2题

把放射性(14C)尿嘧啶加入到某种细菌的生长培养物中10s,再加入利福平。每隔2min取样1ml,置于冰浴中。把细菌裂

把放射性(14C)尿嘧啶加入到某种细菌的生长培养物中10s,再加入利福平。每隔2min取样1ml,置于冰浴中。把细菌裂解,并加入DNase,消化一小时确保DNA消化完全。然后每份样品分为两部分。一份用于沉降,另一份与带有细菌cla基因的噬菌体DNA杂交。数据列在下表中。将数据用半对数纸作图,并假定mRNA是一级衰变。

时间(min)配可沉淀物的放射活性

(cpm)

可杂交的放射活性

(cpm)

t=0

t=2

t=4

t=6

t=8

t=10

t=12

t=14

t=16

t=18

50240

35050

27510

23 725

-21850

20920

20460

20230

20110

20100

1820

1375

1060

918

720

561

431

310

248

210

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第3题

杂交实验的严紧性(stringency)是如何控制的?

杂交实验的严紧性(stringency)是如何控制的?

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第4题

严紧杂交实验是如何控制的?
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第5题

分别从胚胎细胞和成熟的B淋巴细胞中提取DNA,用限制酶酶切后做DNA电泳并转膜。以抗体分子的轻链cDN
A作探针进行杂交,结果如下图。解释实验结果。

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第6题

爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且

爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且呈单链形式结合在滤膜上的DNA进行杂交。该RNA:DNA杂交分子与原肠胚期爪蟾胚胎的非标记细胞质总RNA相竞争。图13-3-68A是假设的结果。在另一相应但相反的实验中,放射性原肠胚期细胞质RNA(原肠胚期胚胎用3H-尿苷标记)与滤膜上的总DNA杂交,该RNA:DNA杂交分子与非标记的后期卵细胞质RNA相竞争,结果如图13-3-68B。

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第7题

由于基因家族中成员之间是密切相关的,因此可以用其中一个成员作为探针进行高度严紧的杂交来检测其他成员。
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第8题

mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DN

mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上,加上放射性标记的RNA,然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上,所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中,从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA,然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示,其中的数字表示离DNA左侧的距离,相对距离范围为0~100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验,吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase,该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA);另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录?

表9-3-10

滤膜上的DNA滤膜上的cpm
-RNase+RNase

1250

1260

1240

1245

418

820

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第9题

现已确定果蝇X染色体中一段DNA的限制酶图谱。成年果蝇的mRNA被分离出来,用电泳分开后,转移到硝酸
纤维素膜上。DNA片段A到G被用作探针,与膜进行杂交,结果如图所示:

指出参与转录的DNA片段以及该片段参与哪个mRNA的转录。内含子、外显子的分布与酶切片段之间有什么联系?

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第10题

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:

假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:

画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:

其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。

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第11题

用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针,与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜(同科)DN

用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针,与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜(同科)DNA样品进行杂交。酶1处理的情况下显示出3条带,酶2处理后有1条带,酶3处理后有2条带。如何解释这一结果?

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