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[主观题]
你测序了酵母的一段DNA，并推测含有一个野生型的基因。作为研究策略，你需要获得该基因的突变表型，你如何用克
隆得到的野生型的基因去获得突变型？
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第1题
第2题
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：
表Q25.1 10个克隆的序列
注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。
第4题
第5题
一段很清楚的双脱氧测序胶样品如图16-3-26所示，试着阅读一下，依次从胶的顶的方向阅读，这个序列对应的mRNA可能翻译成一个蛋白质，你能找出这个序列的开放阅读框吗？
第6题
由酵母交配型基因座产生的关键调控蛋白之一是一个抑制蛋白，称做α2。在可交配型的单倍体细胞中，α2对于关闭一系列涉及到交配型特异性的基因是必需的。在α2二倍体细胞中，α2抑制物同α1基因产物协同作用，关闭了除α特异性基因外的一系列单倍体特异性的基因。两类有区别又相互关联的保守DNA序列在这两套控制基因的上游被发现，一个在单倍体特异性基因前，另一个在α特异性基因前。根据这些上游序列的相关性，很有可能α2与两者都结合。然而，它的结合特性在它能识别单倍体特异性基因前必须通过α1蛋白以某种方式进行修饰。至此，这种修饰作用的本质是什么？α1是能催化α2的共价修饰，还是能与α2结合而修饰α2蛋白？
为了认清这些问题，要做三个实验。首先，在单独作用和共同作用两种方式下，测定α1和α2与两种上游调控DNA位点的结合(图13-3-50所示)。α1单独不能同含有任何调控位点的DNA片段结合。然而α2虽能与α专一性片段结合，但是不能同单倍体专一性片段结合。α1和α2的混合物同两者都能结合。
在第二个实验中，大量的含α专一性序列的未标记DNA加入到α1和α2蛋白的混合物中。在这样的条件下，单倍体专一性片段仍被束缚。同样，如果加入过量的含有单倍体专一性片段的未标记DNA到混合物中，α专一性片段仍然被束缚。
在第三个实验中，改变不同的α1和α2的比例，当α2过量时，同单倍体专一性片段的结合减弱，而当α1过量时，同α专一性片段的结合减弱。
第9题
你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段，其中一个长为400bp，另一个长900bp，你想要如图16-3-20(1)所示将它们连接起来产生一个杂合基因，如果你的推测是正确的话，就会得到令人惊奇的新物质。
你在DNA连接酶存在情况下将两种片段混合在一起并且进行孵育，30分钟后和8小时后，你取一些样品进行琼脂糖凝胶电泳分析，你惊讶地发现连接得到了一系列复杂的DNA片段而不是所需的1.3kb小片段，并且发现孵育时间越长，小片段浓度越低而大片段浓度增加，如果你用BamHI切割连接后的重组体，你会重新获得开始的两片段(图16-3-20(2)A)。
令人吃惊的是，你将从琼脂糖凝胶中纯化得到的1.3kb片段用BamHI消化，检查它的结构，与预想的一样，可以得到最初的两片段(图16-3-20(2)B)。这就可以确定这是你所需的结构。但是，你用EcoRl消化另一份样品，你希望通过消化得到300bp的片段和700bp的片段，但你跑的电泳是一系列DNA片段(图16-3-20(2)B)。
第10题
A.MIPS
B.COG
C.GenBank
D.expasy
E.KEGG
