题目内容
(请给出正确答案)
[主观题]
cDNA克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。
答案
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第1题
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第10题
A.蛋白质芯片是利用诸如抗原抗体等专一的结合来达到检测的目的
B.蛋白质芯片最常用的检测方式为荧光检测
C.该技术可以将一个cDNA克隆库所获得的蛋白质产物排列在一个载体上
D.可以利用表达重组抗体基因的细菌将材料排列在硅材料上
E.该法不及扫描噬菌体抗体库灵敏