第2题
在真核细胞中DNA折叠成为染色质是如何影响转录的?你可以应用C-负转录单元解决这个问题。这个模板在RNApolⅡ及四个转录因子(TFⅡA、TFⅡB、TFⅡD和TFⅡE)存在下能很好地转录。
为了检验染色质对转录的影响,首先将模板装配成核小体(核小体来自蛙卯母细胞抽提物)并纯化染色质模板,然后加入转录组分,结果没有发生转录(图13-3-48)。然后改变步骤,首先,在缺少NTPs的情况下将模板和转录组分一起温育,然后将模板装配为核小体,再纯化染色质模板。现在,当要再加入转录组分时,转录顺利进行就如在裸露的DNA模板上进行的转录一样,这样得出结论:一个或多个转录组分一定同模板结合,然后使启动子可以接近。
为了更进一步了解这种现象,再做两个附加实验。在第~个实验中,在温育过程中少加一种转录组分;在第二个实验中,在进行转录分析中少加一种转录组分。
第3题
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。
第4题
图Q7.1 SV40早期启动子序列
第5题
A.都是同源二聚体。
B.都结合于不同的回文对称的DNA序列。
C.一般都结合于中间间隔不同的同一回文序列DNA上。
D.与RXR异源二聚、以结合同向重复序列。
E.在它们的激素存在时位于核中。
第6题
A.大量未标记的RNA与限量的基因组DNA杂交。
B.少量标记的RNA与过量的基因组DNA杂交。
C.过量的DNA足够使所有被标记的RNA被杂交。
D.跟踪者RNA与转录得到它的DNA簇重新结合。
E.大多数的追踪RNA与中等重复序列杂交。
第8题
第10题
利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研究σ因子在原核转录中的作用。在10-10mol和10-11mol两种不同浓度的核心酶催化下32P掺入到RNA的图如下所示,σ因子浓度恒定为10-12mol。
第11题