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[主观题]

用限制酶处理加上凝胶电泳来分析。DNA时,在某实验中观察到除了预期的条带外,DNA还出现在起自跑动最慢的片段

处直到跑动最快的片段外的胶中的各个区域。如果用限制酶处理DNA前分析DNA,就不会发现这些物质,试作解释。
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更多“用限制酶处理加上凝胶电泳来分析。DNA时,在某实验中观察到除了预期的条带外,DNA还出现在起自跑动最慢的片段”相关的问题

第1题

用限制酶处理加上凝胶电泳来分析DNA时,在样品混合物上胶前总是要加热至65℃,如果不进行这一步就会看到额外条
带。为什么会出现这样的情况?
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第2题

用EcoRI酶解具有单个EcoRI位点的Tet-r质粒。将样品退火,用DNA连接酶处理,然后进行CaCl2转化实验。挑选Tet-r菌

用EcoRI酶解具有单个EcoRI位点的Tet-r质粒。将样品退火,用DNA连接酶处理,然后进行CaCl2转化实验。挑选Tet-r菌落。从这些菌落中分离出质粒DNA,进行凝胶电泳,结果发现有两类菌落:一类菌落在原来质粒的预期位置处出现一条带;另一类菌落则得到一条移动慢得多的带。这条移动慢的带可能是何物?(用BglI酶处理Kan-rAmp-r质粒会破坏amp基因)

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第3题

噬菌体中DNA分子具有短的互补的单链末端,当它感染细菌时该分子环化。图16-3-7的A和B分别显示用Bam限制酶处理

噬菌体中DNA分子具有短的互补的单链末端,当它感染细菌时该分子环化。图16-3-7的A和B分别显示用Bam限制酶处理游离的DNA分子后得到的限制酶图谱和凝胶电泳条带。从受感染的细胞中分离出DNA进行特性研究。在某些条件下酶解后的片段经电泳后结果如图16-3-7C所示。试问在这些条件下DNA呈怎样的结构?

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第4题

野生型噬菌体X4DNA用限制酶处理后,用凝胶电泳分离纯化得5个片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V。现通过与X4的遗传图(图16-3-9)比

野生型噬菌体X4DNA用限制酶处理后,用凝胶电泳分离纯化得5个片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V。现通过与X4的遗传图(图16-3-9)比较来对这些片段定位。用图16-3-9所示5种突变进行25次转染试验。实验包括:从单突变体得到的完整DNA以及纯化的片段,用它对Rec+细胞进行转染。数据如表16-3-9所示(数值表示每微克完整DNA分子产生的噬菌斑数)。试问片段的顺序如何(自图的左边开始)?

表16-3-9

突变体
a-

b-

c

d-

e-

21

6

32681

1

22

14

0

16

3

17 813

21842

4

8

0

27

3

4856

11

1

18

8

2

13

1825

30

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第5题

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每条链的顺序,将5'-末端用32P标记(通过多核苷酸激酶催化的反应),再用Maxam-Gilbert序列法测定。切得片段的混合物经电泳后可得到如图2-3-50B所示的图谱(图中迁移方向为自上而下,片段越小移动距离越远)。仔细观察一下电泳图谱,回答下列问题:

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第6题

四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物,小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝,其参

四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物,小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝,其参与有性接合,但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DNA片段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes),其参与基因转录,小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离,以进行进一步的研究。

通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构,长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24,泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体,产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24,泳道2)。用其他限制酶酶切DNA,所得片段大小加起来仍旧不足21kb,而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。

如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火,那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24,泳道3),相似地,如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火,则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24,泳道4)。

请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb?为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变?你认为核糖体小染色体的序列是什么样的?

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第7题

为了构建真核基因组的精确的物理图谱,应选择下列哪些方法:

A.必须分离纯化出个体染色体。

B.DNA必须仅从单倍体细胞(基因组)分离,这可避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而引起的模糊信息。

C.必须进行单个染色体分析,这样的分析仅在细胞分裂后期才有可能进行。

D.必须发现一些在染色体上仅有一个切割位点的限制酶。

E.必须先分离核DNA和细胞器DNA,然后用它们来分析个体的图谱。

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第8题

下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先,利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记

下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先,利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记上32P。样品分成两半,每份用酶Ⅰ或酶Ⅱ酶解。两份酶解物分别进行电泳,记下放射性带。这个实验鉴定出末端片段,提供的信息后面有用。该技术的要点是同时利用未标记的和均一标记的DNA样品。未标记样品用酶Ⅰ酶解,进行电泳时采取措施使条带较宽。用标准的溴化乙锭荧光技术定位这些条带,记录它们的位置,将凝胶浸在碱性溶液中使DNA变性,然后将条带转移到硝酸纤维素膜上,得到图16-3-13所示的谱型。32P标记的样品用酶Ⅱ处理、电泳、记录条带位置,将DNA碱变性,然后转移到含酶Ⅰ片段的硝酸纤维素膜上。转移时使弛P条带与未标记的条带成正交,如图6-3-13所示。然后将膜置于复性条件,洗涤,用放射自显影定位放射性。图16-3-13显示每条胶中条带位置(细线)和放射性位置(小圆点)。标有星号的条带是末端片段。试画出每种酶的限制酶图谱。数字表示每个片段的长度(kb),实心圈表示放射性区域。

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第9题

用一种限制酶切割DNA时可产生的限制片段末端为()

A.平末端和粘末端

B.平末端或粘末端

C.5′突出末端和3′突出末端

D.平末端和5′突出末端

E.平末端和3′突出末端

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第10题

分别从胚胎细胞和成熟的B淋巴细胞中提取DNA,用限制酶酶切后做DNA电泳并转膜。以抗体分子的轻链cDN
A作探针进行杂交,结果如下图。解释实验结果。

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第11题

入噬菌体的线性基因组DNA两端各有一段20个碱基长的单链突出,它们是可以互补的黏性末端,可以连接
起来,使DNA环化。在试管中分别对线性和环状DNA进行限制酶切割 (EcoRⅠ、BarnHⅠ或同时用二者),结果如下页图所示: (1)哪个样品是环状DNA分子? (2)线形DNA总长度是多少? (3)环状DNA的总长度是多少? (4)画出线形DNA的限制酶酶切图谱,标明EcoRⅠ和BamHⅠ所有位点。

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