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用限制酶处理加上凝胶电泳来分析。DNA时,在某实验中观察到除了预期的条带外,DNA还出现在起自跑动最慢的片段
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第2题
用EcoRI酶解具有单个EcoRI位点的Tet-r质粒。将样品退火,用DNA连接酶处理,然后进行CaCl2转化实验。挑选Tet-r菌落。从这些菌落中分离出质粒DNA,进行凝胶电泳,结果发现有两类菌落:一类菌落在原来质粒的预期位置处出现一条带;另一类菌落则得到一条移动慢得多的带。这条移动慢的带可能是何物?(用BglI酶处理Kan-rAmp-r质粒会破坏amp基因)
第3题
噬菌体中DNA分子具有短的互补的单链末端,当它感染细菌时该分子环化。图16-3-7的A和B分别显示用Bam限制酶处理游离的DNA分子后得到的限制酶图谱和凝胶电泳条带。从受感染的细胞中分离出DNA进行特性研究。在某些条件下酶解后的片段经电泳后结果如图16-3-7C所示。试问在这些条件下DNA呈怎样的结构?
第4题
野生型噬菌体X4DNA用限制酶处理后,用凝胶电泳分离纯化得5个片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V。现通过与X4的遗传图(图16-3-9)比较来对这些片段定位。用图16-3-9所示5种突变进行25次转染试验。实验包括:从单突变体得到的完整DNA以及纯化的片段,用它对Rec+细胞进行转染。数据如表16-3-9所示(数值表示每微克完整DNA分子产生的噬菌斑数)。试问片段的顺序如何(自图的左边开始)?
表16-3-9 | |||||
突变体 | |||||
Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | Ⅴ | |
a- b- c d- e- | 21 6 32681 1 22 | 14 0 16 3 17 813 | 21842 4 8 0 27 | 3 4856 11 1 18 | 8 2 13 1825 30 |
第5题
用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每条链的顺序,将5'-末端用32P标记(通过多核苷酸激酶催化的反应),再用Maxam-Gilbert序列法测定。切得片段的混合物经电泳后可得到如图2-3-50B所示的图谱(图中迁移方向为自上而下,片段越小移动距离越远)。仔细观察一下电泳图谱,回答下列问题:
第6题
四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物,小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝,其参与有性接合,但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DNA片段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes),其参与基因转录,小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离,以进行进一步的研究。
通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构,长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24,泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体,产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24,泳道2)。用其他限制酶酶切DNA,所得片段大小加起来仍旧不足21kb,而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。
如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火,那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24,泳道3),相似地,如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火,则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24,泳道4)。
请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb?为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变?你认为核糖体小染色体的序列是什么样的?
第7题
A.必须分离纯化出个体染色体。
B.DNA必须仅从单倍体细胞(基因组)分离,这可避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而引起的模糊信息。
C.必须进行单个染色体分析,这样的分析仅在细胞分裂后期才有可能进行。
D.必须发现一些在染色体上仅有一个切割位点的限制酶。
E.必须先分离核DNA和细胞器DNA,然后用它们来分析个体的图谱。
第8题
下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先,利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记上32P。样品分成两半,每份用酶Ⅰ或酶Ⅱ酶解。两份酶解物分别进行电泳,记下放射性带。这个实验鉴定出末端片段,提供的信息后面有用。该技术的要点是同时利用未标记的和均一标记的DNA样品。未标记样品用酶Ⅰ酶解,进行电泳时采取措施使条带较宽。用标准的溴化乙锭荧光技术定位这些条带,记录它们的位置,将凝胶浸在碱性溶液中使DNA变性,然后将条带转移到硝酸纤维素膜上,得到图16-3-13所示的谱型。32P标记的样品用酶Ⅱ处理、电泳、记录条带位置,将DNA碱变性,然后转移到含酶Ⅰ片段的硝酸纤维素膜上。转移时使弛P条带与未标记的条带成正交,如图6-3-13所示。然后将膜置于复性条件,洗涤,用放射自显影定位放射性。图16-3-13显示每条胶中条带位置(细线)和放射性位置(小圆点)。标有星号的条带是末端片段。试画出每种酶的限制酶图谱。数字表示每个片段的长度(kb),实心圈表示放射性区域。
第11题