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[主观题]

你在研究一个癌基因,其编码一个转录因子,在细菌中表达时,基因产生的蛋白完全不可溶,无法直接检验其功能,尽

管你可以获得该蛋白的很好抗体。免疫染色显示,该蛋白定位于核内。如果能判定它结合什么样的DNA序列,就能通过在有关已知基因启动子天然位点的现存序列库中找到它调控的基因。

你的导师建议你用PCR来扩增该蛋白结合的少量存在的DNA分子。她的主意如图16-3-38,①合成一些26核苷酸长的随机寡核苷酸链,两边以确定的25核苷酸序列作为PCR扩增的引物位点(图16-3-38(A));②把这些寡核苷酸加到含转录因子的细胞粗提物中,转录因子能结合到带结合位点的寡聚物上;③用该因子的抗体分离出结合到该因子上的寡核苷酸链;④PCR扩增出该核苷酸链,并分析其顺序。

你用0.2ng的单链随机序列寡聚物开始实验,用PCR引物中的一个把它转变为双链DNA。在图16-3-38(B)中,四轮选择和扩增后,用BamHI和EcoRI处理分离的DNA,把片段克隆到质粒上,并给十个不同的克隆测序(表16-3-38)。

你在研究一个癌基因,其编码一个转录因子,在细菌中表达时,基因产生的蛋白完全不可溶,无法直接检验其功能

你在研究一个癌基因,其编码一个转录因子,在细菌中表达时,基因产生的蛋白完全不可溶,无法直接检验其功能

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第1题

c-fos基因是FBJ鼠骨肉瘤病毒所携带的癌基因的细胞内同源基因。它的功能未知,c-fos的激活是对于生长因子的最
早的转录反应之一。在小鼠细胞中,c-fos的转录水平在5min内显著增加,在10~15min时达最大值之后突然下降。为了研究人类c-fos基因的瞬时诱导的机制,可以克隆一个DNA片段,它含有全长的转录单元,这个转录单元起始于转录起始点上游-750bp处,终止于+1.5kb的poly(A)加入位点(图13-3-60(1)A)。当把这个克隆转至小鼠细胞中时(我们可以较为容易区分克隆与内源性c-fos基因的mRNA),一天后加入血清(富含生长因子)刺激细胞生长。你发现同样的瞬时诱导(图13-3-60(2)A)。尽管与小鼠基因相比,时间上有略微的延长。

通过分析一个类似增强子元件(SRE血清反应元件)的一系列缺失突变体,发现在转录起始点上游的300核苷酸序列对于在加入血清后增强转录是必需的。通过建立包含有人β-球蛋白部分基因(它编码一个极为稳定的mRNA)的各种杂交基因来研究c-fos mRNA的稳定性。球蛋白基因的结构和两种杂交基因如图13-3-60(1)B、C、D所示。在低血清浓度下,当杂交基因转染鼠细胞时,24小时后它才对血清作出反应(图13-3-60(2)B、C所示)。

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第2题

假设某癌基因编码一个生长因子,那么 (1)反转录病毒如何影响癌基因,从而导致细胞癌变?

假设某癌基因编码一个生长因子,那么 (1)反转录病毒如何影响癌基因,从而导致细胞癌变? (2)如何用实验证明?

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第3题

一个癌基因,从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时,该基因的产物是完全不溶的,这影响了对其功
能的直接检测。免疫染色表明,这种蛋白质定位于细胞核内,如同推测的一样,是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列,就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点,从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA,思路是(图Q25.8):①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体,在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)];②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中,转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸;④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸,N代表任何一种核苷酸;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路,用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验,这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链,经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后,用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA,将片段克隆到质粒中,并测定了10个独立的克隆(表Q25.1),问:

表Q25.1 10个克隆的序列

注:画线的序列是PCR引物部位,两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始,所有序列中结合位点的方向都是相同的。

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第4题

利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研究σ因子在原核转录

利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研究σ因子在原核转录中的作用。在10-10mol和10-11mol两种不同浓度的核心酶催化下32P掺入到RNA的图如下所示,σ因子浓度恒定为10-12mol。

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第5题

关于胚胎发生早期的基因表达,哪项错误A.基因组中参与发育调控的主要是编码转录因子或调节蛋白的

关于胚胎发生早期的基因表达,哪项错误

A.基因组中参与发育调控的主要是编码转录因子或调节蛋白的基因

B.正常情况下,一个个体的所有细胞都含有等同的细胞核遗传信息

C.细胞间的差异通过基因活动的差异来体现

D.卵裂的细胞周期很短,几乎只由S期和G1期组成

E.卵裂期的细胞(卵裂球)其DNA合成旺盛

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第6题

导致嗜睡症的微生物锥虫,能改变其表面糖蛋白壳,从而避开宿主的免疫性防御。你现正在研究可变的表面糖蛋白(VS

导致嗜睡症的微生物锥虫,能改变其表面糖蛋白壳,从而避开宿主的免疫性防御。你现正在研究可变的表面糖蛋白(VSG)的合成,已把编码基因定位于某个染色体的近端粒处。然而你还未能将启动子定位,实验表明它可能与VSG基因相距几千个核苷酸。一个老朋友建议你利用紫外线辐射来给启动子定位,他曾经成功地用这项技术定位腺病毒转录单元。因为RNA聚合酶转录时不能通过嘧啶二聚体(紫外线辐射造成的损伤),转录过程对紫外线的敏感性可用来测定转录起始点与转录区间的距离。由于没有其他方法可选,于是你决定试一试。

你采用核糖体RNA基因的转录来检验系统。5SRNA转录单位略多于100个核苷酸,而18S、5.8S和28S和28SRNA是一个8kb长转录单元的一部分。将锥虫置于逐渐增强的紫外线照射下,分离出核,与32P-dNTP温育。接着从核中分离出RNA,将之与5SRNA和核糖体转录单元和部分克隆出的DNA杂交。以每个位点上数目的对数对紫外剂量作图,得到一条直线,直线的斜率与杂交探针距启动子的距离成比例。用来自VSG基因开始区域的探针重复这个实验,发现对VSG基因和核糖体转录单元的探针4而言,前者转录被抑制的速度较后者快7倍。

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第7题

你已经建立了一个体外转录系统。使用一个已知的DNA片段,它可在一个病毒启动子的控制下被转录。当在系统中加入
纯化的RNApolⅡ、TFⅡD(TATA结合因子)和TFⅡB、TFⅡE(与RNA聚合酶结合)后,DNA开始被转录。然而,体外转录系统的低效率暗示可能有一个额外的调控序列与转录因子结合,而这种转录因子在纯化的组合当中并不存在,为了寻找与这个被推测的调控因子结合的DNA序列。你做了一系列在转录起始点上游的缺失(如图13-3-44B所示),比较它们在纯化系统中及在细胞粗提物中的转录活性。作为内部控制,你将每种缺失体与一个能产生生长转录本的未缺失的模板混合(如图13-3-44A)。这些分析的结果(图13-3-44C)显示,一直缺失到-61,对转录仍无影响,而-11的缺失在两种系统中都会使转录受到抑制。使人惊奇的是一50位的缺失体可以像未损失的模板一样在纯化系统内进行有效的转录。但是在细胞粗提物中却没有这种作用。

你纯化了与这种效应有关的蛋白,显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍,面对-50缺失的模板无激活作用,印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合,虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的,但当TFⅡD存在时,它可与结合位点稳定地结合。

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第8题

利用病毒癌基因作为探针在人、哺乳动物基因组探测到的同源序列是

A、细胞生长因子

B、细胞转化因子

C、转录因子

D、细胞癌基因

E、肿瘤易感基因

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第9题

特殊转录因子的纯化给人带来很多困难,因为分析速度慢,并且转录因子本身不稳定,当你鉴定出你所需片段时,这个

因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。

为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。

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第10题

即使反转录病毒不带有一个癌基因也能引起原癌基因转化,列出发生这种情况的三种途径。
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第11题

p53蛋白作为核转录调节因子主要对一些癌基因的转录激活和抑制起作用。()

p53蛋白作为核转录调节因子主要对一些癌基因的转录激活和抑制起作用。( )

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