在启动子附近含有许多特殊序列,其中TATA框主要决定___________,而CAAT框和GC框决定__________。
第1题
真核细胞编码蛋白质基因的启动子包含了一个基本的启动元(promotor element),这个启动元可被RNA聚合酶Ⅱ以及一些基本的转录因子(如TFⅡD,TFⅡB等)识别。但是启动子自身的基本活性很低,而且结合于启动子邻近上游区(-120~-30)或更远的增强小区域的其他特殊转录因子,对它有不变的影响。分析这些调控区发现它们一般包含有许多不同的序列特异性转录因子的结合位点。
用转染试验分析这样一个复合物调控区的某一单因子识别位点表明,结合位点的活性较低。但是连接这一结合位点的多重拷贝在一起经常会产生协同促进作用。下面显示的是关于转录因子FE结合位点的DNA保守序列(20bp)的数据。克隆这个保守DNA序列在基础启动子(basal promoter)和报道基因(reporter gene)的上游。并导入细胞培养48hr。如何叙述该实验中的激活模式?
表13-3-19 | |
拷贝数 | 报道基因活性 |
0 1 2 3 4 | 20 30 135 125 460 |
第4题
同源框基因的特点不包括
A.DNA序列大多较短
B.结构组成复杂
C.含有多个启动子
D.转录方向多是自5ˊ端至3ˊ端
E.同源框片段序列都位于该基因3ˊ的外显子上
第5题
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。
第6题
第8题
A.在两个含有同源基因的序列间重组称为同源性重组。
B.在两个精确互补序列(没有单个碱基的增加或减少)间的重组称为同源性重组。
C.在包含有高度相似性片段的序列之间的重组称为同源性重组。
D.在任何同源性序列的一条双链间的重组称为同源性重组。
E.在特异性序列间,由酶催化物仅仅作用于特殊的靶序列的重组称为位点特异性重组。
第10题
大肠杆菌阿拉伯糖的代谢调控相当复杂,不仅仅是相关基因在染色体上分散排列(如图13-3-38所示),还有调控蛋白。AraC既是正调控因子又是负调控因子,例如,在araBAD基因簇的调控中(图13-3-41A),当阿拉伯糖存在时(无葡萄糖),与位点1结合的AraC蛋白可使转录比缺乏AraC蛋白的基本转录水平增强100倍。在缺乏阿拉伯糖时与位点2结合的AraC蛋白抑制araBAD基因的转录,与缺乏AraC蛋白的基础转录水平相比较大,约相差10倍。在位点2的负调控和位点1的正调控的综合作用下意味着阿拉伯糖的加入导致arcBAD基因簇转录将提高1000倍。
在位点1处结合的正调控看来是直接的,因为这个位点位于启动子附近,估计使RNA聚合酶更容易结合或激活转录起始复合物。在位点2的结合会使你更加迷惑,位点2位于转录起始点上游270核苷酸处,这样远距离的调控作用更容易使人联想到真核细胞中的增强子。为了更容易地了解位点2的抑制机制,移动整个调控区把它置于grlK基因前,这个基因编码半乳糖激酶,比araBAD基因簇编码的酶更容易分析研究。
为了确定两个araC结合位点间区域的重要性,可按图13-3-41A所示的那样在插入点插入或缺失一段核苷酸。在缺乏阿拉伯糖时启动子的活性研究是通过将细菌在特殊指示平板上进行培养来实践的,如果启动了,活性被完全抑制,菌落是白色的,如果半乳糖激酶产生,则菌落为红色,然后对照着在两个结合位点间的序列插入或缺失多少个核苷酸的图示上(图13-3-41B),画线培养相应的细菌突变体,结果发现,红线和白线是相互散置的。
这些实验结果可以区别三种远距离抑制的潜在机制。
(1)DNA结构上的改变可以使抑制位点向转录位点分散,使启动子不适合RNA聚合酶的结合。
(2)蛋白可以在抑制位点以这样的方式协作,即附加因子不断加入,产生连锁反应,覆盖了整个启动子,由此封闭了转录过程。
(3)DNA可成环以致于蛋白在很远处的抑制位点与DNA结合就可影响转录起始点的蛋白(或DNA)。
你所得的结果证实了哪一种机制,如何解释红色及白色的条纹?
第11题
图Q7.1 SV40早期启动子序列