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题目内容
（请给出正确答案）
将PstI切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属()。
A．同聚物加尾连接
B．人工接头连接
C．平端连接
D．黏性末端连接
答案
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第2题
质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
| 表16-2-10 | |
| 酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
| EcoRI，PstI EcoRl，BamHI EcoRI，HindⅢ EcoRI，SalI EcoRI，BamHI，PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
第3题
A.基因载体的选择与构建 Ⅰ．产生嵌合DNA分子
B.外源基因与载体的拼接 Ⅱ．可能应用限制性核酸内切酶
C.重组DNA分子导入受体细胞 Ⅲ．获得DNA克隆
D.筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞 Ⅳ．应用转化、转染或感染技术
E.表达目的基因编码的蛋白质 Ⅴ．获得转基因产品
第4题
质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
| 表16-2-11 | |
| 酶混合物 | 片段长度(kb) |
| EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI | 5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1 |
第5题
A.编码一个位点特异性的DNA内切酶。
B.有一个包含许多不同应答元件的启动子。
C.在所有酵母细胞中始终表达。
D.编码一个能切割沉默基因座而不切割MAT基因座的产物。
第6题
第8题
1.jpg)
(1)画出该质粒的酶切图谱，标明抗性基因的位置和酶切位点。 (2)如用HindⅢ切割未标记的上述DNA片段，得到5．5 kb和2．5 kb两段。如果在EcoRⅠ的3．5 kb酶切片段上没有HindⅢ切点，则用双酶(EcoRⅠ+HindⅢ)切割后会得到什么样的片段？
第9题
为了区别复制和未复制的模板，利用限制性核酸内切酶(DpnI，MboI和ScuBA)，它们对于所识别序列GATC的甲基化的敏感性不同(如图13-3-52所示)。这个序列一旦在5SRNA的起始处出现，并且如果DNA在这个位点被切割，转录就不能发生。如果模板在野生型大肠杆菌复制，GATC序列的两条链中的A都被细菌中的Dam甲基化酶甲基化，完全甲基化DNA在体外的复制产生子代双螺旋，在第一轮复制中，只有一条链被甲基化，而在以后的复制循环中DNA就无甲基化。你的想法起始于完全甲基化DNA和诱导它在体外进行复制，然后分析用DpnI处理过的复制DNA上的转录。DpnI只切割未复制的完全甲基化DNA，但是它不能切割复制的DNA。因而它对转录有保护作用。
为了验证方案是否起作用，可构建一个比正常的5SRNA基因略长的基因(大基因)，它的RNA转录产物与正常5SRNA基因的转录产物很容易区别(如图13-3-52A所示)。然后将完全甲基化的大基因同甲基化或未甲基化的正常基因混合，在用DpnI、MboI和Sau3A消化前后分别检查它们的转录。限制性内切酶的专一性如图13-3-52A所示。为了验证复制对转录的影响，在完全甲基化的大基因上装配一个转录复合物，诱导复制，并在用限制性内切酶作用前后分别检查转录活性，结果如图13-3-52B所示。
第10题
A.限制酶是外切酶，而不是内切酶。
B.限制酶在特异性序列，即识别位点切割DNA。
C.限制酶能切割DNA而产生一致的末端序列。
D.一些限制酶在其识别位点切割两条DNA链的位置略有不同，形成粘端。
E.一些限制酶在其识别位点切割两条DNA链的位置略有相同，形成钝端。
第11题
四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物，小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝，其参与有性接合，但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DNA片段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes)，其参与基因转录，小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离，以进行进一步的研究。
通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构，长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24，泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体，产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24，泳道2)。用其他限制酶酶切DNA，所得片段大小加起来仍旧不足21kb，而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。
如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火，那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24，泳道3)，相似地，如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火，则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24，泳道4)。
请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb？为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变？你认为核糖体小染色体的序列是什么样的？
