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在1973年构建了第一个有功能的重组DNA分子的科学家是______。
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第1题
Cohen等构建的第一个有功能的重组DNA分子是在()。
A.1973年
B.1970年
C.1980年
D.1975年
第2题
有个设想是拼接体结合在内含子一端的第一个拼接位点上,然后扫过整个内含子寻找位于另一端的第二个拼接位点。这种机制能够保证外显子不被略过。你想验证这个假说,于是构建了两个微基因:一个有双倍的5'拼接位点,另一个有双倍的3'拼接位点(图8-3-33),把这些微基因转入细胞,分析其RNA产物,看在拼接中使用了哪个5'和3'位点。
第3题
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第4题
第5题
第9题
在真核生物中,双链DNA的交换是一种普遍的现象(如在减数分裂过程中的双交换)。而在单倍体的原核生物中,双链DNA的重组性交换是很少见的。