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[主观题]
DNA中与转录起动和调控有关的核苷酸序列称为顺式作用元件。
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更多“DNA中与转录起动和调控有关的核苷酸序列称为顺式作用元件。”相关的问题
第1题
你的导师建议你用PCR来扩增该蛋白结合的少量存在的DNA分子。她的主意如图16-3-38，①合成一些26核苷酸长的随机寡核苷酸链，两边以确定的25核苷酸序列作为PCR扩增的引物位点(图16-3-38(A))；②把这些寡核苷酸加到含转录因子的细胞粗提物中，转录因子能结合到带结合位点的寡聚物上；③用该因子的抗体分离出结合到该因子上的寡核苷酸链；④PCR扩增出该核苷酸链，并分析其顺序。
你用0.2ng的单链随机序列寡聚物开始实验，用PCR引物中的一个把它转变为双链DNA。在图16-3-38(B)中，四轮选择和扩增后，用BamHI和EcoRI处理分离的DNA，把片段克隆到质粒上，并给十个不同的克隆测序(表16-3-38)。
第3题
大肠杆菌阿拉伯糖的代谢调控相当复杂，不仅仅是相关基因在染色体上分散排列(如图13-3-38所示)，还有调控蛋白。AraC既是正调控因子又是负调控因子，例如，在araBAD基因簇的调控中(图13-3-41A)，当阿拉伯糖存在时(无葡萄糖)，与位点1结合的AraC蛋白可使转录比缺乏AraC蛋白的基本转录水平增强100倍。在缺乏阿拉伯糖时与位点2结合的AraC蛋白抑制araBAD基因的转录，与缺乏AraC蛋白的基础转录水平相比较大，约相差10倍。在位点2的负调控和位点1的正调控的综合作用下意味着阿拉伯糖的加入导致arcBAD基因簇转录将提高1000倍。
在位点1处结合的正调控看来是直接的，因为这个位点位于启动子附近，估计使RNA聚合酶更容易结合或激活转录起始复合物。在位点2的结合会使你更加迷惑，位点2位于转录起始点上游270核苷酸处，这样远距离的调控作用更容易使人联想到真核细胞中的增强子。为了更容易地了解位点2的抑制机制，移动整个调控区把它置于grlK基因前，这个基因编码半乳糖激酶，比araBAD基因簇编码的酶更容易分析研究。
为了确定两个araC结合位点间区域的重要性，可按图13-3-41A所示的那样在插入点插入或缺失一段核苷酸。在缺乏阿拉伯糖时启动子的活性研究是通过将细菌在特殊指示平板上进行培养来实践的，如果启动了，活性被完全抑制，菌落是白色的，如果半乳糖激酶产生，则菌落为红色，然后对照着在两个结合位点间的序列插入或缺失多少个核苷酸的图示上(图13-3-41B)，画线培养相应的细菌突变体，结果发现，红线和白线是相互散置的。
这些实验结果可以区别三种远距离抑制的潜在机制。
(1)DNA结构上的改变可以使抑制位点向转录位点分散，使启动子不适合RNA聚合酶的结合。
(2)蛋白可以在抑制位点以这样的方式协作，即附加因子不断加入，产生连锁反应，覆盖了整个启动子，由此封闭了转录过程。
(3)DNA可成环以致于蛋白在很远处的抑制位点与DNA结合就可影响转录起始点的蛋白(或DNA)。
你所得的结果证实了哪一种机制，如何解释红色及白色的条纹？
第4题
A.都有不能转录为信使RNA的区段
B.都有与RNA聚合酶结合的位点
C.都有调控作用的核苷酸序列
D.都有内含子
第5题
你纯化了与这种效应有关的蛋白，显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍，面对-50缺失的模板无激活作用，印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合，虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的，但当TFⅡD存在时，它可与结合位点稳定地结合。
第7题
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列，将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育，这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成，如果不加GTP，只产生一定长度的RNA转录本，这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现，则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法，你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1)，另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合，除此之外，再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链，它就会终止转录)，通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。
第9题
A.合成一种功能蛋白或RNA分子所必需的全部DNA芋列
B.DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列
C.遗传物质的最小功能单位
D.有些只有转录功能而没有翻译功能
第10题
第11题
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：
表Q25.1 10个克隆的序列
注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。
