下图是用双脱氧法测定DNA序列所得出的结果，请写出该段DNA的序列。

下图是用双脱氧法测定DNA序列所得出的结果，请写出该段DNA的序列。请帮忙给出正确答案和分析，谢

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发布时间：2022-12-04

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第1题

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对其功

能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

表Q25.1 10个克隆的序列

注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。

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第2题

你在研究一个癌基因，其编码一个转录因子，在细菌中表达时，基因产生的蛋白完全不可溶，无法直接检验其功能，尽

管你可以获得该蛋白的很好抗体。免疫染色显示，该蛋白定位于核内。如果能判定它结合什么样的DNA序列，就能通过在有关已知基因启动子天然位点的现存序列库中找到它调控的基因。

你的导师建议你用PCR来扩增该蛋白结合的少量存在的DNA分子。她的主意如图16-3-38，①合成一些26核苷酸长的随机寡核苷酸链，两边以确定的25核苷酸序列作为PCR扩增的引物位点(图16-3-38(A))；②把这些寡核苷酸加到含转录因子的细胞粗提物中，转录因子能结合到带结合位点的寡聚物上；③用该因子的抗体分离出结合到该因子上的寡核苷酸链；④PCR扩增出该核苷酸链，并分析其顺序。

你用0.2ng的单链随机序列寡聚物开始实验，用PCR引物中的一个把它转变为双链DNA。在图16-3-38(B)中，四轮选择和扩增后，用BamHI和EcoRI处理分离的DNA，把片段克隆到质粒上，并给十个不同的克隆测序(表16-3-38)。

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第3题

人类基因组DNA经过Sau3A（G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上（G↓GATCC)。BamHⅠ位于

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：

假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：

画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：

其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。

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第4题

如果RNA聚合酶和4种核糖核苷三磷酸不与4种脱氧核糖核苷三磷酸一起添加，SC3噬菌体的单链环状DNA分子就不能用

聚合酶Ⅲ复制。产物是一种含少量核糖核苷酸的双链开环DNA。为了分析起始的核苷酸顺序，使用α-³²P标记的脱氧核苷三磷酸，核糖核苷三磷酸上不标记。反应产物用碱处理，某些释放的放射性只进入腺苷3'-P(非脱氧型)。

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第5题

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子，得到一个DNA片段。该酶作用于如图2－3－50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子，得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每条链的顺序，将5'-末端用³²P标记(通过多核苷酸激酶催化的反应)，再用Maxam-Gilbert序列法测定。切得片段的混合物经电泳后可得到如图2-3-50B所示的图谱(图中迁移方向为自上而下，片段越小移动距离越远)。仔细观察一下电泳图谱，回答下列问题：