穿梭质粒载体是指能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒,但其所用的复制起点不同。()
穿梭质粒载体是指能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒,但其所用的复制起点不同。( )
穿梭质粒载体是指能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒,但其所用的复制起点不同。( )
第2题
酵母的两种不同的环状质粒DNA载体(YP1和YP2)用于将leu-转化成leu+,从这两种质粒转化获得的leu+培养物,都能与leu-表型的细胞交配。
YP1leu+×leu-→所有的子代表型都是leu+,所有子代的DNA都能与YP1特异探针显示阳性反应;
YP1leu+×leu→一半的子代为leu+,能够与YP2特异的探针杂交,另一半为leu-,不能与YP2特异探针杂交。
解释这两种不同质粒转化造成的差异。
第4题
A.测序质粒通常为高拷贝复制质粒
B.整合质粒可以准确地整合到受体细胞染色体上
C.一个穿梭质粒可以在任意供体和受体细胞间转移
D.表达载体通常有两套启动子
第6题
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第7题
A.通过电激法将大质粒转化到大肠杆菌比酵母的转化率提高了10~100倍
B. BAC载体在细菌中以环形超螺旋状态存在,使分离操作起来相对容易
C. BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝
D. 克隆到BAC、载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列