第1题
酸突变的快捷方法,这个试验使用成对的寡核苷酸,其中一个被生物素标记,另一个由放射性同位素(或荧光素)标记。如图16-3-29(B)所示是对镰刀型贫血症突变的检测。
在这个实验中,成对的寡核苷酸链与来自不同个体的DNA杂交并在DNA连接酶存在下进行孵育。生物素标记的寡核苷酸随后结合到固定化链霉素抗生物素蛋白上。通过放射自显影就可以看到相连的放射性标记,如图16-3-29(C)所示。
第2题
某纯化的RNA分子经T1核糖核酸酶彻底酶解,然后分离寡核苷酸产物。其中一个片段经碱水解产生1腺苷,1Up,和2Cp残基。同一片段用多核苷酸激酶和γ-32P-ATP处理,继而用蛇毒磷酸二酯酶彻底酶解,产生带放射性的pU和非放射性的pC和pA。
第3题
第4题
第5题
用Maxam-Gilbert法测定单链DNA分子的核苷酸顺序。一份DNA样品进行四种不同处理。
(1)DNA与硫酸二甲酯反应,该试剂使G和A都甲基化.但与G的反应快5倍。然后加热DNA,这样可除去甲基化的G和A残基。然后加碱,这时与甲基化碱基相连的糖从两侧的磷酸二酯键上断裂下来。
(2)如第1步中用硫酸二甲酯处理后将DNA放入稀酸溶液;这种处理使A优先脱落。在碱性条件下DNA的磷酸二酯键断裂。
(3)DNA与肼反应,再用吡啶处理。和第1和第2步的结果一样,磷酸二酯键发生断裂,但在T和C部位断裂频率相同。
(4)在2mol/LNaCl中进行第3步处理;这样可防止T处的断裂。这几步反应控制在每50个碱基中有一个发生甲基化或肼解反应。进行彻底水解反应。每组反应混合物由一组片段组成,它们的长度由特定碱基的位置决定。聚丙烯酰胺凝胶电泳可将每组混合物中的片段根据长度进行分离。通常DNA末端用32P标记,这样凝胶中的片段可以用放射自显影定位。根据每个位置上带的密度可以从凝胶上读出顺序。须注意的是带的位置可确定碱基的部位,但是带的密度与断裂的几率有关。图2-3-49显示某样品的有关图谱。
第7题
第8题
A.三链核苷酸
B.三链形成寡核苷酸
C.单链形成寡核苷酸
D.二链形成寡核苷酸
E.三链DNA
第9题
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第11题