题目内容
（请给出正确答案）
[主观题]
举例说明DNA结合蛋白对基因转录的影响，另简述鉴别DNA结合蛋白在DNA分子上结合位点的两种常用方法。
答案
查看答案
重要提示：请勿将账号共享给其他人使用，违者账号将被封禁！
查看《购买须知》>>>
请输入或粘贴题目内容
搜题
拍照、语音搜题，请扫码下载APP
题目内容
（请给出正确答案）
答案
更多“举例说明DNA结合蛋白对基因转录的影响，另简述鉴别DNA结合蛋白在DNA分子上结合位点的两种常用方法。”相关的问题
第1题
A.转录靶基因
B. 下调发育相关基因的表达水平
C. 作为DNA结合的转录因子
D. 发生群体的转位
E. 作为3'Hox基因的异位调节蛋白
第2题
第3题
大肠杆菌阿拉伯糖的代谢调控相当复杂，不仅仅是相关基因在染色体上分散排列(如图13-3-38所示)，还有调控蛋白。AraC既是正调控因子又是负调控因子，例如，在araBAD基因簇的调控中(图13-3-41A)，当阿拉伯糖存在时(无葡萄糖)，与位点1结合的AraC蛋白可使转录比缺乏AraC蛋白的基本转录水平增强100倍。在缺乏阿拉伯糖时与位点2结合的AraC蛋白抑制araBAD基因的转录，与缺乏AraC蛋白的基础转录水平相比较大，约相差10倍。在位点2的负调控和位点1的正调控的综合作用下意味着阿拉伯糖的加入导致arcBAD基因簇转录将提高1000倍。
在位点1处结合的正调控看来是直接的，因为这个位点位于启动子附近，估计使RNA聚合酶更容易结合或激活转录起始复合物。在位点2的结合会使你更加迷惑，位点2位于转录起始点上游270核苷酸处，这样远距离的调控作用更容易使人联想到真核细胞中的增强子。为了更容易地了解位点2的抑制机制，移动整个调控区把它置于grlK基因前，这个基因编码半乳糖激酶，比araBAD基因簇编码的酶更容易分析研究。
为了确定两个araC结合位点间区域的重要性，可按图13-3-41A所示的那样在插入点插入或缺失一段核苷酸。在缺乏阿拉伯糖时启动子的活性研究是通过将细菌在特殊指示平板上进行培养来实践的，如果启动了，活性被完全抑制，菌落是白色的，如果半乳糖激酶产生，则菌落为红色，然后对照着在两个结合位点间的序列插入或缺失多少个核苷酸的图示上(图13-3-41B)，画线培养相应的细菌突变体，结果发现，红线和白线是相互散置的。
这些实验结果可以区别三种远距离抑制的潜在机制。
(1)DNA结构上的改变可以使抑制位点向转录位点分散，使启动子不适合RNA聚合酶的结合。
(2)蛋白可以在抑制位点以这样的方式协作，即附加因子不断加入，产生连锁反应，覆盖了整个启动子，由此封闭了转录过程。
(3)DNA可成环以致于蛋白在很远处的抑制位点与DNA结合就可影响转录起始点的蛋白(或DNA)。
你所得的结果证实了哪一种机制，如何解释红色及白色的条纹？
第4题
第5题
第7题
你的导师建议你用PCR来扩增该蛋白结合的少量存在的DNA分子。她的主意如图16-3-38，①合成一些26核苷酸长的随机寡核苷酸链，两边以确定的25核苷酸序列作为PCR扩增的引物位点(图16-3-38(A))；②把这些寡核苷酸加到含转录因子的细胞粗提物中，转录因子能结合到带结合位点的寡聚物上；③用该因子的抗体分离出结合到该因子上的寡核苷酸链；④PCR扩增出该核苷酸链，并分析其顺序。
你用0.2ng的单链随机序列寡聚物开始实验，用PCR引物中的一个把它转变为双链DNA。在图16-3-38(B)中，四轮选择和扩增后，用BamHI和EcoRI处理分离的DNA，把片段克隆到质粒上，并给十个不同的克隆测序(表16-3-38)。
第8题
第9题
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：
表Q25.1 10个克隆的序列
注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。
第10题
真核细胞编码蛋白质基因的启动子包含了一个基本的启动元(promotor element)，这个启动元可被RNA聚合酶Ⅱ以及一些基本的转录因子(如TFⅡD，TFⅡB等)识别。但是启动子自身的基本活性很低，而且结合于启动子邻近上游区(-120～-30)或更远的增强小区域的其他特殊转录因子，对它有不变的影响。分析这些调控区发现它们一般包含有许多不同的序列特异性转录因子的结合位点。
用转染试验分析这样一个复合物调控区的某一单因子识别位点表明，结合位点的活性较低。但是连接这一结合位点的多重拷贝在一起经常会产生协同促进作用。下面显示的是关于转录因子FE结合位点的DNA保守序列(20bp)的数据。克隆这个保守DNA序列在基础启动子(basal promoter)和报道基因(reporter gene)的上游。并导入细胞培养48hr。如何叙述该实验中的激活模式？
| 表13-3-19 | |
| 拷贝数 | 报道基因活性 |
| 0 1 2 3 4 | 20 30 135 125 460 |
第11题
为了区别复制和未复制的模板，利用限制性核酸内切酶(DpnI，MboI和ScuBA)，它们对于所识别序列GATC的甲基化的敏感性不同(如图13-3-52所示)。这个序列一旦在5SRNA的起始处出现，并且如果DNA在这个位点被切割，转录就不能发生。如果模板在野生型大肠杆菌复制，GATC序列的两条链中的A都被细菌中的Dam甲基化酶甲基化，完全甲基化DNA在体外的复制产生子代双螺旋，在第一轮复制中，只有一条链被甲基化，而在以后的复制循环中DNA就无甲基化。你的想法起始于完全甲基化DNA和诱导它在体外进行复制，然后分析用DpnI处理过的复制DNA上的转录。DpnI只切割未复制的完全甲基化DNA，但是它不能切割复制的DNA。因而它对转录有保护作用。
为了验证方案是否起作用，可构建一个比正常的5SRNA基因略长的基因(大基因)，它的RNA转录产物与正常5SRNA基因的转录产物很容易区别(如图13-3-52A所示)。然后将完全甲基化的大基因同甲基化或未甲基化的正常基因混合，在用DpnI、MboI和Sau3A消化前后分别检查它们的转录。限制性内切酶的专一性如图13-3-52A所示。为了验证复制对转录的影响，在完全甲基化的大基因上装配一个转录复合物，诱导复制，并在用限制性内切酶作用前后分别检查转录活性，结果如图13-3-52B所示。
