用限制性内切酶进行DNA切割，有时会出现拖尾现象，即酶切不充分，可能的原因有哪些？

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发布时间：2022-12-04

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第1题

转录复合物在DNA复制过程中是否仍能与DNA保持结合的关系。如果是这样，它将作为一种生物记忆，允许子细胞继承

亲本细胞的基因表达模式。为了验证此想法，可在非洲瓜蛙(Xenopus)5SRNA基因上装配一个有活性的转录复合物，而Xenopus 5SRNA基因本身存在于质粒中，诱导它进行复制，然后在复制的基因上检测转录。这些步骤都可在体外实现。

为了区别复制和未复制的模板，利用限制性核酸内切酶(DpnI，MboI和ScuBA)，它们对于所识别序列GATC的甲基化的敏感性不同(如图13-3-52所示)。这个序列一旦在5SRNA的起始处出现，并且如果DNA在这个位点被切割，转录就不能发生。如果模板在野生型大肠杆菌复制，GATC序列的两条链中的A都被细菌中的Dam甲基化酶甲基化，完全甲基化DNA在体外的复制产生子代双螺旋，在第一轮复制中，只有一条链被甲基化，而在以后的复制循环中DNA就无甲基化。你的想法起始于完全甲基化DNA和诱导它在体外进行复制，然后分析用DpnI处理过的复制DNA上的转录。DpnI只切割未复制的完全甲基化DNA，但是它不能切割复制的DNA。因而它对转录有保护作用。

为了验证方案是否起作用，可构建一个比正常的5SRNA基因略长的基因(大基因)，它的RNA转录产物与正常5SRNA基因的转录产物很容易区别(如图13-3-52A所示)。然后将完全甲基化的大基因同甲基化或未甲基化的正常基因混合，在用DpnI、MboI和Sau3A消化前后分别检查它们的转录。限制性内切酶的专一性如图13-3-52A所示。为了验证复制对转录的影响，在完全甲基化的大基因上装配一个转录复合物，诱导复制，并在用限制性内切酶作用前后分别检查转录活性，结果如图13-3-52B所示。

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第2题

纯化基因组DNA必须切割成合适大小的片段才能与载体构成重组，一般常用的切割方法有( )。

A.物理剪切法

B.化学法

C.限制性内切酶消化法

D.生物法

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第3题

对两个单倍体的面包酵母菌株进行比较，菌株1（交配型α)来自北美，菌株2（交配型a)来自欧洲。用单一的

对两个单倍体的面包酵母菌株进行比较，菌株1(交配型α)来自北美，菌株2(交配型a)来自欧洲。用单一的限制性内切酶将DNA线性化后，在凝胶电泳上将DNA分开。菌株1的样品出现两条带，一条很大，另一条很小；菌株2的样品产生两条中等大小的条带。如果运用标准的二倍体出芽方法分析，在二倍体细胞以及细胞所产生的四分子中会得到什么结果(酶切片段是什么样的)？

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第4题

Ⅱ类限制性内切酶切割DNA链，可能产生

A.带5"羟端的黏性末端

B.带3"磷酸端的黏性末端

C.5"端突出型黏性末端

D.3"端突出型黏性末端

E.平末端

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第5题

用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针，与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜（同科)DN

用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针，与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜(同科)DNA样品进行杂交。酶1处理的情况下显示出3条带，酶2处理后有1条带，酶3处理后有2条带。如何解释这一结果？