第1题
第2题
用一种限制性内切核酸酶消化某大型的环状质粒DNA。得到的片段随机重装配(即片段不再按原来顺序排列),选择与原来质粒分子量相同的环状分子。然后用由这些片段组成的分子感染不含质粒的宿主细胞。
第3题
A.把诱变剂加入细菌培养基中,分离与其野生型对应的恢复突变株
B.不能得到反式互补,因在带有突变基因的质粒对突变型菌株的转化中,不储存野生型
C.不能获得反式互补,因通过带有突变基因的质粒来进行野生型转化,不会产生突变株
D.获得反式互补,因通过带有野生型基因的质粒来进行突变型细菌转化,能储存野生型表型
第4题
A.把诱变剂加入细菌培养基中,分离与其野生型表型对应的回复突变株。
B.不能得到反式互补,因在带有突变基因的质粒对突变菌株的转化中,将不贮存野生型。
C.不能获得反式互补,因通过带有突变基因的质粒来进行野生型的转化,将不会产生突变株。
D.有反式互补,因通过带有突变基因的质粒进行突变型细菌的转化能产生野生型表型。
E.获得反式互补,因通过带有野生型基因的质粒进行突变型细菌的转化能贮存野生型表型。
第5题
用EcoRI酶解具有单个EcoRI位点的Tet-r质粒。将样品退火,用DNA连接酶处理,然后进行CaCl2转化实验。挑选Tet-r菌落。从这些菌落中分离出质粒DNA,进行凝胶电泳,结果发现有两类菌落:一类菌落在原来质粒的预期位置处出现一条带;另一类菌落则得到一条移动慢得多的带。这条移动慢的带可能是何物?(用BglI酶处理Kan-rAmp-r质粒会破坏amp基因)
第6题
第8题
第9题
第11题
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。